導讀：為了刺激研究界實(shí)現更高標準的抗體重復性，抗體驗證工作組(IWGAV)近日出臺了一套指南。這些指南發(fā)表在9月5日的《Nature Methods》雜志上，強調了抗體驗證需要針對應用和背景來(lái)開(kāi)展。

　　據估計，因抗體質(zhì)量不佳，生命科學(xué)領(lǐng)域每年的損失達到8億美元。同時(shí)，這也造成了無(wú)數的實(shí)驗失敗，浪費了寶貴的樣本和科學(xué)家的青春。盡管科學(xué)界已經(jīng)意識到這個(gè)問(wèn)題，但目前仍然缺乏抗體驗證的整體框架。

　　為了刺激研究界實(shí)現更高標準的抗體重復性，抗體驗證工作組(IWGAV)近日出臺了一套指南。這些指南發(fā)表在9月5日的《Nature Methods》雜志上，強調了抗體驗證需要針對應用和背景來(lái)開(kāi)展。

　　這篇題為“A Proposal for Validation of Antibodies”的文章是由IWGAV的數名成員發(fā)表的，包括工作組主席、瑞典*理工學(xué)院的微生物學(xué)教授Mathias Uhlén。文章提出了五點(diǎn)，以指導特定應用中的抗體驗證。

　　• 遺傳策略：測定對照細胞或組織中的相關(guān)信號，這些對照中的目標基因已利用CRISPR或RNAi等技術(shù)敲除或敲低。

　　• 正交策略：利用不依賴(lài)抗體的方法定量多個(gè)樣品，然后檢查依賴(lài)抗體和不依賴(lài)抗體這兩種定量之間的相關(guān)性。

　　• 獨立抗體策略：利用兩個(gè)或更多的獨立抗體來(lái)識別目標蛋白上的不同表位，再通過(guò)比較和定量分析來(lái)確認特異性。

　　• 表達標記蛋白：修飾內源的目標基因，增加親和標簽或熒光蛋白的序列。標記蛋白的信號可與基于抗體的檢測相關(guān)聯(lián)。

　　• 免疫捕獲加上質(zhì)譜分析：將免疫捕獲與MS分析相結合，以確定與純化的抗體直接作用的蛋白質(zhì)，以及可能與目標蛋白形成復合物的蛋白質(zhì)。

　　這篇文章還對生產(chǎn)商和使用者提出建議，以確保長(cháng)期的抗體重復性。作者們建議使用者在自己特定的應用或樣品中，至少運用上面的一種策略來(lái)開(kāi)展驗證。同時(shí)，他們還建議使用者按照一定的形式報告，包含貨號、批號和RRID(研究資源標識符)，以確保研究中使用的任何抗體可被明確識別。

　　同時(shí)，作者們也向生產(chǎn)商提出了類(lèi)似的建議，至少運用一種策略來(lái)驗證，并提供盡可能多的抗體信息，如鑒定檢測中的抗體濃度、細胞提取物的濃度、抗體生產(chǎn)所用的免疫原、抗體-表位的親和力、緩沖液配方等。

　　“這篇文章邁出了重要的*步，有望制定出廣泛接受的抗體驗證標準，確保生命醫學(xué)研究使用高質(zhì)量且一致的抗體，”Uhlén博士表示。“我們期待抗體用戶(hù)、出版商、資助機構和生產(chǎn)商的反饋，以幫助加強這個(gè)初步建議，并確保這些基本工具的可靠性。”

　　在文章發(fā)布之后，抗體生產(chǎn)商之一 – 賽默飛世爾公司承諾，它將按照IWGAV的建議來(lái)驗證其抗體的特異性。賽默飛表示，它將很好地遵循這個(gè)指南，并借助其的質(zhì)譜、CRISPR和siRNA平臺來(lái)開(kāi)展驗證。此外，對于通過(guò)新標準的抗體，公司會(huì )在上標注，以表示它通過(guò)特異性檢測。

　　賽默飛世爾的生命科學(xué)部門(mén)總裁Peter Silvester表示：“賽默飛世爾很高興看到抗體驗證工作組的*個(gè)建議。我們相信，這些標準將有助于對抗用戶(hù)在使用這些關(guān)鍵工具時(shí)面臨的挑戰。我們承諾按照IWGAV的標準來(lái)測試我們的抗體，這證明了我們對科學(xué)的承諾，以及我們提供特異抗體的使命。”

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